第一百零三章 问题可能出在样本采集时间上（1/2）

第二天一早，温楚莹拿着图表冲进会议室。

“教授、张老师、师姐，我发现问题可能出在样本采集时间上！”

她把图表摊在桌上，

“你们看，下午 2 点采集的样本，环境温度 2c左右，ct 值波动最小；

上午 10 点温度 - 2c，ct 值普遍偏高，而且波动大。

我怀疑低温会抑制耐药基因的表达，导致检测时扩增效率不稳定。”

张老师凑过来看，手指点在图表上：

“这个规律…… 有点像我之前看过的一篇文献，

里面提到极端环境微生物有‘温度适应性表达’特性，低于 0c时，耐药基因的启动子活性会下降 50%。

我当时觉得和咱们的样本关联不大，就没提。”

王教授的眼睛亮了：

“那咱们就做验证实验！今天分三个时间点采集：上午 10 点、下午 2 点、下午 4 点，

每个时间点采 3 份样本，统一在 4c条件下保存，然后同时检测，看数据差异。”

采集团队按照安排行动，下午五点，样本准时送到实验室。

温楚莹和李师姐立刻开始处理 —— 统一离心 10 分钟，加 5% 甘油保存，然后同时加载到三台 pcr 仪上。

等待结果的四十分钟里，没人说话，大家都盯着仪器屏幕，连王教授都时不时看一眼手表。

“出来了！” 李师姐先喊出声。

屏幕上，下午 2 点采集的样本 ct 值分别是 28.5、28.7、28.6，波动只有 0.1；

下午 4 点的是 29.2、29.4、29.3，波动 0.1；

而上午 10 点的是 32.1、32.5、32.3，波动 0.4，且整体 ct 值偏高。

“真的是采集时间的问题！” 张老师激动地拍了下桌子，“楚莹，你立大功了！”

可温楚莹却没立刻松气：

“但上午的样本 ct 值还是偏高，要是采集团队遇到特殊情况，只能上午采集怎么办？咱们得想办法让上午的样本也能稳定检测。”

王教授点头：“说得对。张老师，你查文献看看有没有能激活低温下耐药基因表达的试剂；

楚莹，你试试在样本处理时加入不同浓度的诱导剂，比如 iptg，看看能不能改善；

李黎，你负责优化样本保存的温度梯度。”

接下来的两天，团队又进入新的攻坚。

温楚莹测试了 0.1mmol\/l、0.2mmol\/l、0.3mmol\/l 三种浓度的 iptg，

结果 0.2mmol\/l 时，上午样本的 ct 值降到了 29.5 左右，波动 0.3，接近下午样本的水平。

可新的问题又出现了 —— 加入 iptg 后，样本的非特异性扩增增加，出现了杂峰。

“怎么办？杂峰要是不消除，会影响结果判断。” 李师姐看着屏幕上的杂峰，皱起眉。

温楚莹盯着杂峰的位置，突然想起在学校做竞赛时，林导师教过的 “引物特异性优化法”：

“咱们调整一下引物的退火温度，之前用的是 58c，试试 59c和 60c，看看杂峰会不会消失。”

她做了三个温度梯度的实验，当退火温度升到 59.5c时，杂峰果然消失了，ct 值稳定在 29.3±0.2。

“成功了！” 她忍不住欢呼，小初砚在意识里放起了虚拟烟花：“宿主太棒啦！终于解决了！”